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即将举行的网络研讨会:实现无需离心的流式细胞术样品制备工作流程的标准化

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新闻 单细胞测序的主要步骤和特点介绍
单细胞测序的主要步骤和特点介绍
  单细胞测序是指DNA研究,涉及对单细胞微生物相对简单的基因组和人类细胞更大更复杂的基因组进行测序。它们是细胞生物学的基本单位,研究人员正在更加努力地将它们分开,分别进行研究和比较。更大更复杂的人类细胞基因组。随着测序成本的大幅降低,从单个细胞中破译30亿个碱基的基因组并逐细胞比较序列正在成为现实。

  目前,单细胞测序常见的应用是在肿瘤研究中。研究人员近期通过单细胞基因组扩增、测序和组装,从海洋样本中鉴定出一种单细胞细菌。

  单细胞测序的兴起不仅是新概念炒作,相关领域也是如此。长期以来,由于技术瓶颈,许多生物学问题没有得到解决。现在突然有一种技术可以解决这些问题,性价比很高,导致这种技术的大量应用。

  以单细胞转录组测序技术为例,主要包括以下四个步骤,其中重点是如何捕获/分选单细胞,这是决定单细胞检测成本和通量的关键步骤。

  主要步骤:在细胞分选方法中,主要有特异性分选和非特异性分选两种方法。这两种方法之间的关系有点类似于定量(仅针对特定的靶基因)和转录组测序。通过特定标记选择特定的靶细胞,然后对靶细胞进行测序,因此特定选择方法通常具有较低的通量。

  非特异性选择方法通常是高通量方法。一般是通过特定的技术从一个样本中随机捕获大量的细胞单体,然后对大量的细胞进行直接的平行测序,再从大量的单细胞数据中找到感兴趣的细胞类型,用于后续的分析。在逆转录扩增的过程中,每个细胞的cDNA都会连接上一个特定的接头序列,保证了后续混合测序后每个细胞的数据能够再次解析。该芯片可用于96个细胞的并行测序,降低了成本。

  单细胞测序对目标组织细胞图谱进行全景扫描的单细胞测序,一般需要检测至少几千甚至几十万个细胞,但芯片通量只有96个细胞,这意味着多次芯片捕获,会增加芯片耗材的成本。因此,我们需要更高通量的技术。转录组测序是一种在单细胞水平上对mRNA进行高通量测序的新技术。通过在整体水平上研究单个细胞的基因表达,成功解决了细胞分子机制研究中的共性问题,如细胞异质性、细胞数量少、无法进行常规高通量测序等。

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