流式细胞术样本制备中常见的问题

流式细胞术是一种在科研和临床实验室中广泛应用的强大技术，用于分析细胞群体、蛋白表达及其他细胞特征。然而，流式细胞术数据的质量和可重复性在很大程度上依赖于精准的样本前处理。在这一关键步骤中，即使是细微的操作误差，也可能导致高背景信号、数据偏差和结果失真。

研究人员往往更关注后续步骤（如抗体染色）的优化，而忽略了上游的样本制备。事实上，研究者不仅需要确保样本制备方法适合所研究的细胞类型和标记物，还应考虑洗涤方式对细胞状态的影响。

以下总结了几类常见问题，以及通过改进样本制备可避免或缓解的策略。

1. 背景信号高与非特异性结合

问题： 高背景信号与非特异性抗体结合会掩盖目标细胞群，使数据出现歧义或偏差。

解决方案：

Ÿ   增加洗涤缓冲液体积，或调整洗涤次数与时间；

Ÿ   采用更温和的洗涤方法可减少死亡细胞数量，从而降低非特异性结合带来的背景干扰。

2. 洗涤过程中细胞丢失

传统离心洗涤或手动洗涤容易造成细胞损伤或丢失，导致细胞计数不准、重复性差，尤其是在处理脆弱或稀有细胞时。

解决方案：

• 调整离心速度可部分减少细胞损伤；

• 对脆弱细胞，可采用手动洗涤或无洗涤（no-wash）方案；

• 或使用磁珠分选技术以保护敏感或稀有细胞群；

• 但这些方法往往需要较高的细胞密度（约 0.5 × 10⁶ cells/mL）以弥补洗涤损耗。

如果有一种技术，能在洗涤过程中既不丢失细胞，又不需要额外补充细胞量，会怎样？

3. 细胞活性问题

死亡或濒死细胞可能引入伪信号，干扰群体分析，并且这些受损细胞更易吸附非特异性染料，进一步增加分析难度。

解决方案：

• 缩短样本处理时间；

• 使用温和洗涤方法以减轻细胞应激；

• 使用活死染料区分活细胞与死细胞；

• 全程在冰上或4°C条件下处理样本也有助于维持细胞活性。

4. 荧光强度过高

当样本中残留过多抗体时，会出现异常高的荧光强度。

解决方案：

• 使用含表面活性剂（如 Tween^®20 或Triton^® X-100）的洗涤缓冲液；

• 确保充分洗涤以去除游离抗体；

• 采用自动化方法可稳定试剂配比，避免人为混合带来的比例误差。

5. 其他常见问题

• 阴性细胞群体信号过高：抗体孵育间隔增加洗涤步骤可减少伪信号。

• 红细胞裂解不完全： 每个步骤之间可增加额外的洗涤（每步最多三次），以清除红细胞碎片。

洗涤优化是流式样本制备的关键

无论是信号背景、细胞活性还是数据一致性问题，其共同根源都与“洗涤步骤的优化”密切相关。高质量的样本前处理是成功实验的基础，能显著提升数据的可重复性与可信度。

细胞洗涤技术

离心是最常见的细胞洗涤方式，但其机械应力会导致细胞损伤、丢失与碎片增加。手动洗涤虽较温和，但存在操作者差异大、耗时、人体工学负担重、难以保证彻底去除碎片等挑战。

Curiox推出的Laminar Wash™技术（层流洗涤）彻底改变了流式样本制备的格局。该技术通过受控层流液体运动，实现无离心的温和洗涤，显著减少细胞损伤与丢失。
2024年夏季，Curiox推出了升级版的C-FREE™技术，进一步优化了样本洗涤与液体处理流程。基于层流技术的C-FREE通过温和洗涤去除碎片和未结合抗体，减少离心相关的机械应力和细胞损失。通过减少手动操作步骤，C-FREE技术还降低了实验间的变异性并提升一致性。

总结

有效的样本制备是高质量流式细胞分析的基础。通过优化洗涤环节，研究者能够减少假信号，提高数据重现性，获得更准确的实验发现。

借助 Curiox C-FREE™ 技术，您可以：

• 无需额外补充细胞量即可满足下游应用的密度需求；

• 实现自动、稳定的洗涤试剂混合；

• 消除不同操作者间的差异；

• 使流式样本制备进入真正的自动化与标准化时代。

了解 C-FREE™ 技术如何帮助改善实验数据质量、简化工作流程，可访问 www.curioxbio.cn，或联系Curiox获取技术咨询。