作者：Melvin Lye，Curiox Biosystems

长期以来，在流式细胞术的发展历史中，离心一直被视为一种“默认接受的折中方案”。它高效、成熟，并深度嵌入实验室工作流程中。同时，其局限性——例如细胞损失、机械应力以及因操作人员不同而产生的变异——也早已被业内所认识，只是很少在发表的研究中被系统性地讨论。

在过去，当实验周期较短、维度较低或仅用于探索性研究时，这些局限性通常还能被接受。然而如今，流式细胞术已经发展到新的阶段：纵向免疫监测、多组学单细胞图谱研究以及脆弱原代组织分析等应用，对实验一致性与细胞状态保真度提出了更高要求。这也使得“离心”逐渐从一个中性步骤，变成了可能限制研究结果可靠性的结构性因素。

近年来，这种变化开始在高影响力的同行评议文献中显现。在一些关键研究中，免离心（C-FREE）层流洗涤技术（Laminar Wash）不再被当作“新技术”单独评估，而是直接嵌入实验方法学之中，作为保证数据可靠性的基础设施存在。研究人员往往是在“样本处理引入的变异可能影响生物学结论”的情况下，选择采用这一技术。

随着研究复杂度不断提升，实验流程对样本处理稳定性的要求也在不断提高。从标准化实验流程，到脆弱组织研究，再到纵向队列与临床级研究，样本前处理的稳定性已经从“优化选项”变成了“必要前提”。

从“可容忍的变异”到“实验风险”

离心会带来多种难以量化、也难以后期纠正的变异来源，包括：

• 脆弱或激活状态细胞的差异性丢失

• 细胞表面蛋白表达的扰动

• 在弃上清过程中因人为操作造成的差异

单独看，每一种影响似乎都不算严重；但在多时间点、多供体、多条件的实验中，这些偏差会逐渐累积，最终改变数据本身所呈现出的“生物学结构”。

随着流式细胞术开始关注更精细的问题，例如：

• 免疫记忆的长期持续性

• 祖细胞之间的谱系关系

• 原代组织的天然表面分子状态

样本前处理已经不再只是实验准备步骤，而成为影响结果解释的重要组成部分。问题已经不再是“离心是否可行”，而是“离心是否足够可靠，不会影响研究结论”。

纵向免疫研究：当“时间”成为变量

一个典型案例来自2023年发表于《Nature Communications》的研究。该研究分析了SARS-CoV-2反应性B细胞在多个时间点上的变化规律。研究核心结论之一，是早期激活记忆B细胞能够长期持续存在。

为了能够在长期、多时间点样本之间稳定比较低频抗原特异性细胞群，研究人员必须尽量减少样本处理过程中引入的变异。否则，实验观察到的差异很可能来源于处理过程，而非真实生物学变化。

在这种背景下，研究团队将免离心层流洗涤纳入样本处理流程，实际上体现了一种方法学判断：必须稳定机械处理过程，才能确保最终观察到的是生物学差异，而不是处理伪影。值得注意的是，文章并没有专门强调Laminar Wash技术本身，它只是低调地出现在methods部分，像基础设施一样“隐身”于实验流程之中。

图谱级研究与跨供体一致性

另一个更具代表性的案例，是2024年发表于《Nature Immunology》的研究“An immunophenotype-coupled transcriptomic atlas of human hematopoietic progenitors” (PubMed ID: 38514887)。该研究旨在构建结合免疫表型与转录组信息的人类造血祖细胞参考图谱。

这种图谱型研究对样本处理提出了极高要求：不同供体之间必须具备高度可比性、不同检测模态之间必须能够准确对齐、数据需要具有长期可复用性。在这种情况下，前处理过程中引入的变异无法被简单“平均掉”，因为它会永久写入图谱数据本身。

研究团队因此采用免离心Laminar Wash技术，以减少前处理中的物理扰动，避免影响细胞谱系关系与表型结构的解析。这里，Laminar Wash不再是“提高便利性”的工具，而是支撑整个图谱可靠性的底层条件。

脆弱原代组织：保护天然状态

离心的局限性在脆弱原代组织中更加明显。2023年发表于《Nature Cardiovascular Research》的一项研究中，研究人员对人类原代心脏细胞进行了surfaceome（细胞表面蛋白组）分析。心肌细胞对机械应力极为敏感，而保持天然表面蛋白表达状态，是该研究成立的前提。

在这种场景下，离心不仅可能导致细胞损失，更可能改变研究对象本身。研究团队采用Laminar Wash，目的正是尽可能减少处理过程对细胞状态的扰动，使得最终检测到的表面蛋白特征能够真实反映生物学状态，而非实验操作结果。

也就是说，免离心样本处理不仅提升了实验稳定性，更拓展了“哪些问题可以被可信研究”的边界。

从单篇研究到方法学标准

Laminar Wash已经开始从“实验室创新”走向“标准化方法”。在《Methods in Molecular Biology》中，研究人员发表了GENTIL成人心肌细胞分离方法，其中明确将Laminar Wash写入标准实验流程。Methods类文献与普通研究论文不同，它们的重点不在于展示“创新”，而在于定义“可重复的方法”。

因此，当一种技术被写入这类标准化方法学文献时，意味着它已经不再被视为可选优化，而开始成为一种可复制、可培训、可标准化的实验基础流程。

一个值得关注的趋势

纵观这些研究——无论是纵向免疫学、多组学图谱，还是脆弱原代组织分析——都呈现出一个共同趋势：研究人员选择Laminar Wash，并不是为了提升通量或操作便利，而是为了消除可能影响数据可信度的样本处理变异。

更值得注意的是，这项技术往往并不会被专门强调。它只是安静地出现在实验方法部分。这通常意味着一种技术已经跨越“新技术验证阶段”，开始成为领域默认接受的基础设施。

总结

Laminar Wash本身并不会直接产生生物学发现，但它重新划定了可被可靠研究的边界。近期文献表明，随着流式细胞术与单细胞研究向纵向研究、图谱级数据以及脆弱原代组织方向发展，免离心样本制备正在逐渐从“性能增强选项”，转变为“实验可信性的基础前提”。

从这个意义上说，Laminar Wash所代表的，并不仅仅是一种新的洗涤方式，而是样本处理理念的一次悄然转变：它并不改变研究人员测量什么，而是提升了他们对数据的信任程度，以及数据在规模化、长期化和临床化研究中的可支撑性。

参考文献：

1.      Rydyznski Moderbacher C, et al.

Longitudinal single-cell analysis of SARS-CoV-2–reactive B cells uncovers persistence of early activated memory B cells.

Nature Communications. 2023.

DOI: 10.1038/s41467-023-42972-2

2.      Zhang X, et al.

An immunophenotype-coupled transcriptomic atlas of human hematopoietic progenitors.

Nature Immunology. 2024.

PubMed ID: 38514887

3.      Luecke LB, et al.

Surfaceome mapping of primary human heart cells identifies cell-type–specific surface protein signatures.

Nature Cardiovascular Research. 2023.

4.      Luecke LB, et al.

The GENTIL Method for Isolation of Adult Human Cardiomyocytes.

Methods in Molecular Biology. Springer Nature, 2023.

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